Идентификация бактерий рода протеус в кормах животного происхождения
“УТВЕРЖДАЮ”
Начальник Главного
управления ветеринарии МСХ СССР А.Д.Третьяков 21 мая 1981 года
Настоящая методика
предназначена для ветеринарных лабораторий, лабораторий ОПВК
мясокомбинатов и других учреждений, с целью индикации бактерий рода
“Протеус” в сухих кормах.
I.
Порядок проведения исследований
1.1. Первый день
исследования. 50 г корма помещают в колбу с 500 мл стерильного
физиологического раствора или 0,1% стерильной пептонной воды и
тщательно встряхивают на шуттель-аппарате в течение 30 минут. Для
количественного учета и получения чистой культуры первичный посев
исследуемого материала производят по 1,0 мл до разведения
10 в конденсационную воду свежескошенного
агара (метод Шукевича) или ТТХ-агара (Даниленко И.П.) и по 0,5 мл
на поверхность питательных сред Плоскирева или висмут-сульфит агар.
Посевы помещают в термостат при
температуре 37° на 18-24 часа.
1.2. Второй день
исследования.
1.2.1 Просматривают
титрационные посевы на скошенном МПА или ТТХ-агаре. Если
регистрируют “ползучий” нежный вуалеобразный рост (на МПА) или
нежно-розовый (на ТТХ-агаре), то определяют титр по наименьшему
количеству засеянного материала, в котором обнаружен рост бактерий
рода “Протеус”.
1.2.2 Просматривают чашки
с посевом и отмечают колонии, подлежащие дальнейшему исследованию.
На среде Плоскирева бактерии растут в виде прозрачных колоний, зона
роста которых окрашивается в желтоватый цвет; на висмут-сульфит
агаре через 24-48 часов – в виде изолированных колоний
темно-коричневого цвета, окраска среды не изменяется. Если рост
18-24 часовой культуры однородный, то для дальнейшего изучения
используют не менее 4-х колоний, при росте различных колоний – не
менее шести.
1.2.3 Для определения
родовой принадлежности изучаемого штамма изолированные колонии
отвивают в пробирку с МПБ, из которого после 4-5 часовой инкубации
при 37°С производят пересев на следующие среды: (приложение N
1)
–
агар с фенилаланином для определения фермента
фенилаланиндезаминазы;
–
среду с мочевиной для определения фермента уреазы;
–
бульон или пептонную воду для определения индола;
–
среду с 0,5% мальтозы;
–
скошенный агар или TГX-агар для серологического титрования и
определения патогенности.
Среды помещают в
термостат при 37°С на 16-18 часов.
Наличие фермента
фенилаланиндезаминазы определяют путем наслоения на скошенную
поверхность среды 4-5 капель 10%-ного раствора хлорного железа.
Появление интенсивной зеленой окраски свидетельствует о наличии
фермента.
Гидролиз мочевины
(наличие фермента уреазы) устанавливают по изменению цвета среды из
желтого в красный. Индол определяют на МПБ по специальным
индикаторным бумажкам, вложенным под пробку пробирки. Индол можно
определять путем наслоения на среду реактива Эрлиха (0,5 мл), при
этом появление красного кольца на границе жидкостей через 2-5 минут
свидетельствует о положительном результате.
1.3. Третий день
исследования. Учитывают результаты ферментативной активности
культур. Грамотрицательные бактерии, гидролизующие мочевину,
дезамнирующие фенилаланин, относятся к роду “Протеус”. На основании
способности к индолообразованию и ферментации мальтозы определяют
принадлежность к одной из биохимических групп: штаммы,
ферментирующие мальтозу и образующие индол, относятся к Р.
vulgaris; штаммы, не ферментирующие мальтозу и не образующие
индол, – к Р. mirabilis.
1.4. Серологическое
титрование. Штаммы, отнесенные на основании биохимических
свойств к роду “Протеус”, подвергают серологическому титрованию при
помощи диагностических поливалентных и типовых О- и Н-сывороток в
реакции агглютинации на стекле. Для типирования используют суточную
агаровую культуру. Первоначально культуру испытывают поливалентными
О-сыворотками. В случае, если культура агглютинируется одной из
поливалентных сывороток, продолжают серологическую идентификацию
типовыми сыворотками, входящими в состав поливалентной. При
нечетких результатах, полученных в РА на стекле с живой культурой,
проводят реакцию агглютинации в пробирках или на стекле с прогретой
(1 час – 100°С), отцентрифугированной культурой.
После установления
принадлежности к той или иной О-группе определяют Н-антиген с
поливалентными Н-сыворотками, а затем типовыми. Серологический
вариант определяют в соответствии со схемой Кауфмана и Перча
(приложение 2).
1.5. Определение
патогенности. Патогенные свойства бактерий определяют путем
постановки биологической пробы на белых мышах. С этой целью
внутрибрюшинно заражают не менее трёх мышей весом 16-18 гр. смывом
суточной агаровой культуры или суточной бульонной культурой в дозе
500 миллионов микробных клеток. Концентрацию бактерий устанавливают
по бактерийному стандарту. Культуру признают патогенной в случае
гибели одной или более мышей в первые двое суток после
заражения.
II.
Оценка кормов животного происхождения
2.1. Корма животного
происхождения используют сельскохозяйственным животным и птице при
отрицательных результатах исследования на энтеропатогенные варианты
бактерий рода “Протеус” при условии соответствия кормов по другим
показателям действующих стандартов.
2.2. При обнаружении
энтеропатогенных вариантов бактерий рода “Протеус” сухие корма
животного происхождения подвергают повторной термической обработке
путем проварки при температуре не менее 100°С в течение 1,5 часа
или стерилизации в вакуум-горизонтальных котлах – при температуре
120°С в течение 30 минут.
Методика разработана
Всесоюзным научно-исследовательским институтом ветеринарной
санитарии.
Приложение N 1. Рецепты сред
Приложение N 1
1. Агар с
фенилаланином
Дрожжевой | 100 мл (3,0 |
– | 2,0 гр. |
– | 1,0 гр. |
________________ | |
Источник
г
т
. “УТВЕРВДАЮ”
* Начальник Главного управления ветеринарии MCI CUCF
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА СССР
ГЛАВНОЕ УПРАВЛЕНИЕ
А.Д^Третьяков
ВЕТЕРИНАРИИ (с Государствекиой ветеришрздй инспекцией)
“Ш * JU# 1981 года.
МЕТОДИКА Ь__ ль_
Москва
Г
Индикации бактерий рода “Протеус” в кормах живот:
ГО происхождения
Настоящая методика предназначена для ве-
Шршарннх лабораторий» лабораторий ОПЕК мясокомбинатов и других учреждений, с целью индикации бактерий рода “Протеус” в сухих животных кормах.
I. Порядок проведения исследовании.
1.1. Первый день исследования. 50 г корт помещают в колбу с 0UO мл стерильного физиологического раствора шш О»If стерильном йептонной вода и тщательно встряхивают на шуттель-шшарате в течение 30 минут. Для количественного учета и получешя чистой культуры первичный, посев исследуемого материала производят по 1,0 ш до разведения 1СГ^ в конденсационную воду свежескошенного агара Сме-*од Щукевича) шш ТТХ-агара (Даниленко И.И.) и но 0,5 мл на поверхность питательных сред Плоскирева или висмут-сульфат агар. Посевы помещают в термостат при температуре 37°С на 18-24 часа.
1.2. Второй день исследования.
1.2.1 просматривают титрационные посевы на скошенном МПА или П’Х-агаре. Если регистрируют “ползучий” нежный вуадеобразнык рост Сна МПА) км нежно-розовый (на ТТХ-агаре), то определяют титр по наименьшему количеству засеянного материала, в котором обнаружен рост бактерий рода “Протеус”;
1*2.2 просматривают чашки е посевом и отмечают колонии» подлежащие дальнейшему исследованию. На среде Плоскирева бактерии растут в виде прозрачных колоний, зона роста которых окрашивается в желтоватый цвет; на висжут-сулъфит агаре черев 24-48 часов -н виде изолированных колонии темно-коричневого цвета* окраска среды не изменяется. Если рост 18-24 часовой культуры однородный» то
jura дальнейшего изучения используют не менее 4-х колоний, npf росте различных колони! – не менее шести;
1*2*3 для определения родовой принадлежности изучаемого штамма Изолированные колонии отвивают в пробирку с МПБ, из которого после 4-5 часовой инкубации при 37°С производят пересев на следующие среды: /приложение Is I/
– агар с фенилаланином для определения фермента фенжяаданжг-дезаминазы;
– бульон шш педтонную воду для определения индола;
– среду с мочевиной для определения фермента уреазы;
– среду с 0,5% мальтозы;
– скошенный агар или ТГХ-агар для серологического типирова-иия ш определения патогенности.
Среды помещают в термостат при 37°С на 16-18 часов.
Наличие фермента фенилалашвдезашназы определяют путем наслоения на скошенную поверхность среды 4-5 капель 1®-чтого раствора хлорного железа. Появление интенсивной зеленой окраски свидетельствует о наличии Фермента.
Гидролиз мочевины (наличие фермента уреазы) устанавливают «о изменению цвета среды из желтого в красны!.. Индол определяют на МПБ по специальным индикаторным бумажкам, вложенным под пробку пробирка. Индол можно определять путем наслоения на среду реактива Эрлиха (0,5 мл), при этом появление красного кольца на границе жидкостей через 2-5 шнут свидетельствует о положительном результате.
1.3. Третий день исследования.Учитывают результаты ферментативной активности культур, Грамотрицателъные бактерии, гидролизующие мочевину, дезаминирущие фенилаланин, относятся к роду “Протеус”. На основании способности к индодообразованию и ферментации мальтозы определяют принадлежность к одной из биохимических груш: штаммы, ферментирующие мальтозу ж образующие индол, относятся к £?. УиЦй1-1$> ; штаммы, не ферментирующие мальтозу и не образующее индол г к Рг. mhaSiC/i. .
1.4. Серологическое тидировяше. Штампы, отнесенные на основании биохимических свойств к роду “Протеус”, подвергают серологическому титрованию при помощи диагностических поливалентных
и типовых 0- и Е- сывороток в реакции агглютинации на стекле. Идя тишровалия используют суточную агаровую культуру. Первоначально культуру испытывают поливалентны® 0- сыворотками. В случае.
если культура агглютинируется одной из поливалентных сывороток, продолжают серсшогичеекую идентификацию типовыми сыворотками, входящими в состав поливалентном. При нечетких результатах, полученных в РА на стекле с живой культурой, проводят реакцию аг-юттинацщ в пробирках ила на стекле с прогретой (I час-100°С), отцентрифугированном культурой.
После установления принадлежности к той. или иной О-грунпе определяют Н-антиген с поливалентными Н-снворотками, а затем типовыми. Серологический вариант определяют в соответствии со схемой Кауфмана, и Перча (приложение 2).
I. 5. Определение патогенности. Патогенные свойства бактерий определяют путем постановки биологической пробы на белых мышах. С этой целью внутрмбрш&о заражают не менее трех мышей несом I6-X8 г. смывом суточной агаровой культуры ижш суточной бульонной культурой в дозе 500 млн. микробных клеток. Концентрацию бактерий устанавливают по бактерийному стандарту. Культуру признают патогенной в случае гибели одной или более мышей в первые двое суток после заражения.
II. Оценка кормов животного пшиехождения.
2.1. Корма животного происхождения используют сельскохозяйственным животным и птице при отрицательных результатах исследования на знтеропатогенше варианты бактерий рода “Протеус” при условии соответствия кормов по другим показателям действующих стандартов.
2.2. При обнаружении энтеропатогенных вариантов бактерий рода “Протеус” сухие корма жиеотного происхождения подвергают повторной термической обработке путем проварки при температуре не менее 100°С в течение 1,5 часа или стерилизации в вакуум-го-ризонталыжх котлах – при температуре 120°С в течение 30 минут.
XXX
Методика разработана Всесоюзным научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии.
4.
Приложение II I.
Рецепты сред I. Агар с фенш^аланином
100 мл /3,0 г/
2.0 г
1.0 г
1.0 г 5 г
Дрожжевой экстракт dt – фенилаланин или is – фенилаланин
12,0 г 1000,0 ш
мв^Ш04: 12Н20 KaCI
Агар
Вода дистшшрованная
Ингредиенты растворяют в воде при подогревании, фильтрует К разливают в пробирки по 2-3 ш» стерилизуют при 120°С в течение 10 минут, после пего агар в пробирках скашивают. Одновременной готовят 1СЙ-НЫЙ раствор хлорного железа,
2. ТТХ – агар
К 100 мл расплавленного ШШ добавляют I мл I^-го раствора ИХ /трмфенжлтетразолии хлорид/. Агар перемешивают, разливают В пробирки и готовят скошенный агар.
3. Бульон с мочевиной.
К 100 мл МПБ добавляют 1,0 г.мочевины и 0,2 мл индикатора-1,6^-ного стартового раствора креэолового красного. Стерилизуют текучим паром в течение 3-х дней. Готовая среда имеет желтый цвет.
5.
Приложение № 2,
Упрощенная алтигенно-диагностическая схема бактерий рода “Протеус” (Кауфман, Перча, 1948).
Ьй ген | ! Н-автиген | I 0-антиген | ! Н-антиген | |||
Р* *“ 1 | I | 26 | -5 3; 6 | |||
2 | I | 27 | 2; 3 | |||
3 | I; | 2 | 28 | 2; .3 | ||
4 | I; | 8; | 16 | 29 | 13 | |
Ь | I; | 3 | 30 | I; 2; 4; 13; 15 | ||
G | I; | 2; | 3 | 31 | I; 2 | |
V | I; | 3; | 4 | 32 | I; 3; 5 | |
И | I | 33 | 3 | |||
1) | I» | 2 | 34 | 6 | ||
III | I; | 2; | 3; | 4; 5 | 35 | 2 |
IJ | I; | 2; | 3; | 6 | 36 | 3; 7 |
I; | 2 | 37 | 17 | |||
13 | I; | 2; | 3; | 4 | 38 | I; 2 |
14 | I; | 3 | 39 | 18 | ||
ЕГ> | I; | 7 | 40 | 4 | ||
|С | 1; | 9; | 14 | 41 | I; 2 | |
т | I; | 10 | 42 | I | ||
Р | I | 43 | 2 | |||
in | I; | 3; | II | 44 | II; 19 | |
р | I; | 2 | 45 | II | ||
t | I | 46 | 17 | |||
ig | I | 47 | I | |||
я | 1; | 2; | з; | 12 | 48 | I |
т | I; | 3; | 4; | 13 | 49 | 2 |
р | I | |||||
Источник
Представленная в разделе информация о лекарственных препаратах, методах диагностики и лечения предназначена для медицинских работников и не является инструкцией по применению.
Протей (лат. Proteus) — род грамотрицательных, споронеобразующих, факультативно анаэробных бактерий. Представитель нормальной, условно-патогенной микрофлоры кишечника человека.
Протей. Общие сведения
Протеи имеют вид мелких, 0,3 на 3 мкм, нитевидных палочек. Они отличаются очень активной подвижностью. Протеи обладают токсическими (вырабатывают эндотоксин) и гемолитическими свойствами.
Протеи считаются санитарно-показательными бактериями. Количество обнаруживаемых Proteus mirabilis рассматривают как показатель фекального загрязнения, а Proteus vulgaris — как показатель загрязнения объекта органическими веществами.
В зависимости от способности продуцировать индол, протеи делятся на индол-отрицательные (Proteus mirabilis, Proteus hauseri, Proteus penneri) и индол-положительные (Proteus vulgaris, Proteus inconstans и другие).
Протеи способны продуцировать уреазу, в связи с чем при заселении верхних отделов желудочно-кишечного тракта протеем увеличивается вероятность ложноположительных результатов при дыхательных уреазных тестах с изотопом 1ЗС и других с целью выявления Helicobacter pylori-инфекции (Стандарты диагностики и лечения…).
Протей и заболевания человека
Три вида из рода протей — Proteus mirabilis, Proteus vulgaris и Proteus penneri являются патогенными для человека, причем 75–90 % инфекций вызывает Proteus mirabilis.
Наиболее часто острые кишечные инфекции, вызываемые протеем, встречаются у детей раннего возраста: ослабленных или с пониженным иммунитетом. Причиной протейной инфекции также может быть бесконтрольный прием антибиотиков. Заболевание обычно протекает в виде гастроэнтерита, гастрита и колиэнтерита. Очень часто острые кишечные протейные инфекции сопровождается повышением температуры, рвотой, нарушением аппетита, кратковременными судорогами, наблюдается также изменение характера стула и его учащение.
Бактерии рода протей, наряду с другими микроорганизмами, могут вызывать заболевания мочевыводящих путей и почек человека, в частности, острый и хронический простатит, цистит, пиелонефрит, в том числе большинство ксантогранулематозных пиелонефритов. Proteus mirabilis является причиной раневых инфекций. Proteus vulgaris присутствует в кишечнике здорового человека и многих животных, он обнаруживается в навозе, почве и загрязненных водах.
Proteus spp. высевается из тканей анального канала у больных с хронической анальной трещиной (Адиев Р.Ф., Малеева Е.А.).
Протей в результатах анализа кала на дисбактериоз
При микробиологическом анализе кала протей рассматривается в комплексе с другими условно-патогенными бактериями, относящимися к семейству энтеробактерий и входящими в состав нормальной микрофлоры кишечника человека (кроме протея это клебсиелла, энтеробактер, гафния, серратия, морганелла, провиденция, цитробактер и др.). В норме общее количество этих бактерий (колониеобразующих единиц, КОЕ) в 1 г кала должно быть меньше 104. Большее количество перечисленных бактерий является признаком дисбактериоза.
Протей обнаруживается в кале у 2,0±0,5 % здоровых людей, причем среднее содержание в 1 г кала от 1600 до 4000 КОЕ протея (М.Д.Ардатская, О.Н.Минушкин).
Терапия при избыточном росте протея
Приказом Минздрава РФ № 231 от 9 июня 2003 г. Об утверждении отраслевого стандарта «Протокол ведения больных. Дисбактериоз кишечника» при избыточном росте протея (proteus mirabilis, proteus vulgaris) детям рекомендованы бактериофаги «Интести-бактериофаг жидкий», «Бактериофаг протейный жидкий», «Бактериофаг колипротейный жидкий», «Колипротеофаг в таблетках», «Пиобактериофаг комбинированный жидкий», «Пиополифаг в таблетках», «Пиобактериофаг поливалентный очищенный жидкий».
Интести-бактериофаг жидкий принимают внутрь 4 раза в сутки натощак, за 1–1,5 часа до приёма пищи. Детям первых месяцев жизни препарат в первые два дня приёма разводят кипяченой водой в два раза, в случае отсутствия побочных реакций (срыгивания, высыпаний на коже) в дальнейшем можно применять бактериофаг не разведенным. Перед приёмом бактериофага детям старше 3 лет следует принимать раствор питьевой соды 1/2 чайной ложки на 1/2 стакана воды или щелочную минеральную воду. Разовая доза интести-бактериофага при приёме внутрь:
- детям до 6 месяцев — 10 мл
- детям от 6 месяцев до 1 года — 10–15 мл
- детям от 1 года до 3 лет — 15–20 мл
- пациентам старше 3 лет — 20–30 мл
В клизме 1 раз в день:
- детям до 6 месяцев — 10 мл
- детям от 6 месяцев до 1 года — 20 мл
- детям от 1 года до 3 лет — 30 мл
- пациентам старше 3 лет — 40–60 мл
При избыточном росте протея, как следствии дисбактериоза, кроме бактериофагов, при медикаментозной терапии применяются различные пробиотки (Бифидумбактерин, Бифиформ, Лактобактерин, Ацилакт, Аципол и др.) и/или адекватные конкретному штамму протея и причине дисбактериоза антибиотики (у взрослых).
На сайте GastroScan.ru в разделе «Литература» имеется подраздел «Микрофлора, микробиоценоз, дисбиоз (дисбактериоз)», содержащий статьи, затрагивающие проблемы микробиоценоза и дисбиоза отделов ЖКТ человека.
Протей в анализе мочи
Бактериурия — наличие бактерий в моче может является признаком воспаления в мочевыводящих путях, мочевом пузыре, почках. При отсутствии каких-либо симптомов, истинная бактериурия (инфекция мочевых путей) диагностируется при наличии не менее 105 микробных тел протеев (или других энтеробактерий) в 1 мл свежевыпущенной мочи, иначе предполагается, что загрязнение мочи происходит при ее заборе. Если бактериурия не сопровождается какими-либо симптомами, тогда она называется бессимптомной бактериурией. Бессимптомная бактериурия не всегда требует немедленного лечения.
При наличии симптомов или при заборе мочи катетером диагностический порог может быть значительно уменьшен. В частности, при наличии соответствующей клинической симптоматики (лихорадка, озноб, тошнота, рвота, боли в поясничной области, дизурия) и выделении не менее 10 лейкоцитов в 1 мкл мочи, критерием для диагностики острого пиелонефрита является наличие не менее 104 протеев (или других патогенных энтеробактерий) в 1 мл свежевыпущенной мочи.
Активность антибиотиков в отношении протея
Антибиотики (из имеющих описание в данном справочнике), активные в отношении протея: рифаксимин. Антибактериальные средства (из имеющих описание в данном справочнике), активные в отношении Proteus mirabilis: амоскициллин (за исключением индолположительных штаммов протея (Proteus vulgaris) которые, наоборот, к амоксициллину устойчивы). Менее активен нифурател (только в отношении Proteus mirabilis и Proteus vulgaris). Большинство штаммов Proteus mirabilis, в отличие от Proteus vulgaris, чувствительны не только к ампициллину, но и к цефалоспоринам. Клотримазол активен в отношении Proteus vulgaris, но не активен в отношении Proteus mirabilis. Proteus mirabilis и Proteus vulgaris чувствительны к левофлоксацину, норфлоксацину, моксифлоксацину и ципрофлоксацину. Протеи устойчивы к тетрациклину, рокситромицину и доксициклину. К нифуроксазиду слабо чувствительны индол-положительные виды протея и резистентен Proteus mirabilis.
Протей в систематике бактерий
Род протей (Proteus) входит в семейство Morganellaceae, порядок Enterobacteriales, класс γ proteobacteria), тип Proteobacteria, царство Бактерии.
Род протей включает следующие виды: Proteus cibarius, Proteus hauseri, Proteus inconstans, Proteus mirabilis, Proteus penneri, Proteus terrae, Proteus vulgaris.
До недавнего времени род протей входил в семейство энтеробактерии (Enterobacteriaceae), которое также относиться к порядку энтеробактерии (Enterobacteriales).
Ранее относящиеся к роду протей бактерии вида Proteus morganii реклассифицированы в Morganella morganii, Proteus myxofaciens — в Cosenzaea myxofaciens, а Proteus rettgeri реклассифицирован в Providencia stuartii и Providencia rettgeri (всё в пределах семейства Morganellaceae).
На верхней иллюстрации — протей вида Proteus penneri.
Назад в раздел
Источник
