Гост отбор проб кормов для микробиологических исследований
ГОСТ Р 51426-99
(ИСО 6887-83)
Группа С19
____________________________________________________________________
Текст Сравнения ГОСТ Р 51426-2016 с ГОСТ Р 51426-99 см. по ссылке.
– Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________
ОКС 65.120
ОКСТУ 9209, 9709
Дата введения 2001-01-01
1 РАЗРАБОТАН творческим коллективом с участием представителей Технического комитета по стандартизации ТК 4 “Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы”
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 “Комбикорма, белково-витаминные добавки, премиксы”
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 581-ст
3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6887-83* “Микробиология. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований”, за исключением наименования, 1, 2, 7
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. – Примечание изготовителя базы данных.
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма, комбикормовое сырье и представляет собой общее руководство по приготовлению разведений для выявления наличия (отсутствия) или определения количества аэробных микроорганизмов (в настоящее время руководство должно использоваться в сочетании с методами, описанными в “Правилах бактериологического исследования кормов”).
Обязательные требования к порядку проведения разведений изложены в разделе 9.
2 Нормативные ссылки
ГОСТ 13496.0-80* Комбикорма, сырье. Методы отбора проб
_______________
* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО 6497 [1].
ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498-98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб
3 Определения
В настоящем стандарте применяют следующие термины с соответствующими определениями:
исходная суспензия (первичное разведение): Суспензия, раствор или эмульсия, полученные после того, как взвешенное или измеренное количество исследуемого продукта было смешано, если это необходимо, с использованием смесителя и соблюдением соответствующих предосторожностей (см. примечание к 9) с девятикратным количеством жидкости для разведения (разбавитель см. 5) так, чтобы крупные частицы, если они есть, могли осесть.
Примечание – В некоторых случаях, в особенности для продуктов, у которых исходная 1+9 суспензия слишком вязкая или слишком густая, необходимо прибавить больше разбавителя. Это следует учитывать в последующих действиях и при представлении результатов;
дальнейшие десятикратные разведения: Суспензии или растворы, полученные путем смешивания определенного объема исходной суспензии с девятикратным объемом разбавителя и повторения этой процедуры до тех пор, пока не будет получена серия десятикратных разведений, пригодных для инокуляции культуральной среды;
специальный стандарт: Стандарт или официальное руководство, описывающие исследование конкретного продукта (или группы продуктов) на идентификацию или количественный подсчет определенного микроорганизма (или группы микроорганизмов) и описывающие особенности отбора и приготовления испытуемых проб.
4 Сущность метода
Сущность метода заключается в приготовлении исходной суспензии с равномерным, насколько это возможно для испытуемой пробы, распределением микроорганизмов. При необходимости, для того, чтобы снизить количество микроорганизмов на единицу объема и сделать возможным после инкубации наблюдение за их ростом или подсчет колоний, готовят десятикратные разведения.
Приемлемое количество микроорганизмов обычно составляет:
– для наиболее вероятного метода подсчета с использованием трех пробирок: 1 микроорганизм в 10 см самого высокого десятикратного разведения;
– для метода подсчета колоний: от 30 до 300 колоний (для некоторых групп, например, колиформ от 15 до 150 колоний).
5 Разбавитель
5.1 Чтобы добиться воспроизводимости результатов, для приготовления разбавителя следует использовать обезвоженные основные компоненты или обезвоженный полноценный препарат.
Следует строго соблюдать инструкции изготовителя.
Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.
Используемая вода должна быть дистиллированной в стеклянном аппарате или деионизированной.
5.2 Состав
Если нет неопровержимых доказательств (например, авторитетных данных или сравнительных опытов), что другие разбавители более приемлемы для данных продуктов, то следует использовать разбавитель следующего состава: 1,0 г пептона, 8,5 г хлористого натрия, 1 дм воды.
5.3 Приготовление
Компоненты растворяют в воде, если это необходимо, с подогревом.
рН разбавителя после стерилизации должен быть равен 7,0 при 25°С.
5.4 Распределение разбавителя
Разбавитель помещают в пробирки, колбы или флаконы соответствующей вместимости в таком количестве, чтобы после стерилизации каждая из них содержала 9 см разбавителя или объем, кратный 9 см (для десятикратных разведений), или 90 см разбавителя, или объем, кратный 90 см (для исходной суспензии). В случае нежидких продуктов см. 9.1.2. Закрывают пробирки, колбы или флаконы пробками.
Пробирки, колбы или флаконы с разбавителем стерилизуют в автоклаве при (121±1)°С в течение 20 мин.
Если разбавитель не используют сразу, его следует хранить в темноте при температуре от 0 до 5°С не более одного месяца в условиях, не допускающих никаких изменений в его объеме или составе.
Примечание – При подсчете нескольких групп микроорганизмов, нуждающихся в различных культуральных средах, необходимо распределить все разведения (или некоторые из них) в количествах, превышающих 9 см. Вместимость пробирок, колб или флаконов должна быть соответственно указана.
6 Оборудование
Для проведения испытаний применяют обычное микробиологическое оборудование.
6.1 Прибор для сухой или влажной стерилизации (печь или автоклав, работающий отдельно или как часть прибора для приготовления и распределения сред).
Прибор, который будет входить в контакт с разбавителем, пробой или разведениями, кроме оборудования, которое поставляют стерильным (пластиковые чашки, пластиковые пипетки и т.д.), следует стерилизовать по одному из следующих методов:
– путем выдерживания в печи при 170-175°С в течение 1 ч;
– путем выдерживания в автоклаве при (121±1)°С в течение 20 мин.
6.2 Оборудование для встряхивания (для нежидких продуктов см. 9.1.2).
Допускается использовать один из следующих приборов:
– вращательный встряхиватель, устойчивый к условиям стерилизации, работающий частотой вращения от 8000 до 45000 об/мин со стеклянными или металлическими резервуарами, снабженными крышечками;
– встряхиватель перистальтического типа (стомахер) со стерильными пластиковыми емкостями.
Примечание – Резервуары или пластиковые емкости должны быть достаточной вместимости, позволяющей пробе эффективно перемешиваться с достаточным количеством разбавителя. Как правило, вместимость контейнера должна в два раза превышать объем пробы плюс разбавитель.
6.3 Смеситель, способный перемешивать 1 или 2 см пробы (в случае жидких продуктов) или ее более высокое разведение в пробирке соответствующей вместимости с 9 или 18 см разбавителя для получения гомогенной суспензии, работающий по принципу эксцентрического вращения содержимого пробирки (смеситель Вортекса).
6.4 Колбы или флаконы вместимостью, достаточной для того, чтобы поместить 90 см разбавителя, используемого для приготовления исходной суспензии, или количество, кратное 90 см (для нежидких продуктов см. 9.1.2).
6.5 Пробирки (колбы или флаконы) вместимостью, достаточной для того, чтобы поместить и оставить сверху пространство, необходимое для перемешивания 10 см (или количества, кратного 10 см) пробы жидкого продукта или исходной суспензии, или дальнейших десятикратных разведений.
6.6 Пипетки мерные вместимостью 1 и 2 см, имеющие выпускное отверстие диаметром от 2 до 3 мм, закрытые ватой.
6.7 Градуированные пипетки вместимостью от 10 до 20 см, закрытые ватой.
6.8 рН-метр с погрешностью измерения ±0,1 рН.
6.9 Весы аналитические с точностью взвешивания до 0,01 г.
Примечание – Допускается использовать другое оборудование с такими же или более высокими метрологическими характеристиками. Стеклянная посуда должна быть пригодной к повторной стерилизации и быть химически инертной.
7 Отбор проб
7.1 Отбор проб – по ГОСТ 13496.0.
8 Подготовка испытуемых проб
8.1 Подготовка испытуемых проб – по ГОСТ Р 51419.
9 Порядок проведения разведений
9.1 Испытуемая проба и исходная суспензия (первичное разведение)
Методику, описанную в 9.1.1, используют в следующих случаях:
– для невязких жидких продуктов (вода, молоко и т.д.), в которых распределение микроорганизмов гомогенное или легко делается гомогенным механическим путем (встряхивание и т.д.);
– для жидкой части гетерогенной смеси, которая считается достаточно представительной для всей пробы (например, водная фаза животных или растительных жиров).
Для всех других продуктов используют методику, описанную в 9.1.2.
Чтобы избежать повреждения микроорганизмов в результате внезапных изменений температуры, температура разбавителя в течение всего испытания должна быть приблизительно такой же, как у испытуемой пробы.
9.1.1 Жидкие продукты (которые можно отбирать пипетками)
Встряхивают испытуемую пробу в руке, производя 25 движений вверх и вниз с амплитудой около 30 см за 7 с. Чтобы добиться равномерного распределения микроорганизмов, лучше использовать стандартное механическое устройство. Пипеткой отбирают 1 см исследуемой пробы и вносят его в 9 см разбавителя, избегая контакта пипетки с разбавителем.
Осторожно смешивают исследуемую порцию с разбавителем путем десятикратного втягивания другой пипеткой или в механическом смесителе в течение 5-10 с. Частоту вращения смесителя надо подбирать так, чтобы жидкость, которая образует воронку, не доходила до края сосуда на 2-3 см.
Примечание – Если известно, что для исследуемых продуктов скопления микроорганизмов более эффективно диспергируются механическим перемешиванием, чем пипеткой, и при этом получаются значительно отличающиеся результаты, то специальный стандарт, касающийся изучаемого продукта, должен рекомендовать только один из этих методов, в основном, с использованием механического перемешивания. Условия использования смесителя должны быть точно указаны.
9.1.2 Другие продукты
Взвешивают навеску испытуемой пробы массой (10±0,01) г или массой, кратной 10 г, в резервуаре вращательного встряхивателя или в пластиковой емкости стомахера вместимостью, достаточной для выполнения исследования и приготовления всех дальнейших разведений, требуемых специальным стандартом для исследуемого продукта.
Добавляют объем разбавителя, равный 9 см или кратный 9 см.
Вращательный встряхиватель используют в течение времени, достаточного для того, чтобы получить от 15000 до 20000 оборотов, но не более 2,5 мин.
Стомахер используют в течение 1-2 мин с учетом свойств продукта (см. примечание 2).
Дают осесть крупным частицам в течение 15 мин, затем переносят определенное количество с верхнего слоя суспензии в культуральную пробирку, колбу или флакон, используя большую пипетку. Если имеется слой жира, пробу отбирают из водного слоя. Это количество должно быть достаточным для выполнения всего исследования и приготовления дальнейших разведений. Если дня инокуляции или дальнейшего разведения из исходной суспензии необходимо отобрать только одну порцию, то этот перенос можно не делать.
Примечания
1 Для некоторых продуктов (например, для продуктов с острыми частицами или с компонентами, которые трудно измельчить) стомахер не пригоден. Его следует использовать только тогда, когда имеются доказательства (опубликованные данные или сравнительные тесты), что полученные результаты несущественно отличаются от результатов, полученных с использованием вращательного встряхивателя.
2 Следует учитывать тот факт, что для некоторых продуктов, в частности зерновых, данная выше продолжительность встряхивания не подходит для таких микроорганизмов, как дрожжи и плесень.
3 В этом случае стомахер дает более высокие выходы, чем вращательный встряхиватель. Стомахер следует использовать в течение 10 мин и избегать разделения, так как некоторые дрожжи и плесени могут теряться из надосадочной жидкости.
9.2 Дальнейшие десятикратные разведения
В случае исследования на наличие или отсутствие микроорганизмов в 0,1 см или 0,1 г продукта готовят следующие разведения.
Переносят чистой пипеткой (если смесь исходной суспензии была получена пипеткой, используют ту же пипетку) 1 см исходной суспензии (первичное 1+9 (10) разведение в другую пробирку, содержащую 9 см стерильного разбавителя, избегая контакта пипетки с разбавителем.
Тщательно перемешивают или путем десятикратного втягивания чистой пипеткой, или в механическом смесителе в течение 5-10 с, чтобы получить разведение 10. Частоту вращения смесителя подбирают так, чтобы жидкость во время образования воронки не доходила до краев сосуда на 2-3 см.
При необходимости повторяют эти операции, используя разведение 10 или дальнейшие разведения, чтобы получить разведения 10, 10 и т.д. до тех пор, пока не будет получено приемлемое число микроорганизмов.
9.3 Повторение отдельных процедур
Процедуры, описанные в 9.1 и 9.2, проводят такое число раз, которое установлено специальным стандартом для конкретного продукта.
Примечание – Статистически установлено, что для того, чтобы снизить разброс результатов при использовании метода подсчета колоний, следует повторить процедуры с различными порциями испытуемой пробы, а не удваивать число чашек, заселенных из каждой пробирки одной серии разведений.
9.4 Длительность процедуры
Обычно разведения готовят из испытуемой пробы непосредственно перед анализом; длительность процедуры приготовления разведений и использования их для инокуляции культуральной среды должна быть не более 30 мин.
Примечание – Для некоторых продуктов при приготовлении исходной суспензии необходимо соблюдать меры предосторожности, установленные специальным стандартом для конкретного продукта, например:
– использовать для получения суспензии повышенные температуры;
– регулировать рН пробы;
– восстанавливать обезвоженные продукты и оживлять микроорганизмы, поврежденные во время различных обработок и хранения продукта.
ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное). Библиография
ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)
[1] ИСО 6497 Корма для животных. Методы отбора проб
__________________________________________________________________________________
ОКС 65.120 С19 ОКСТУ 9209, 9709
Ключевые слова: разведение, разбавитель, стерилизация, исходная суспензия, десятичные разведения, культуральная среда, инокуляция
__________________________________________________________________________________
Электронный текст документа
подготовлен АО “Кодекс” и сверен по:
официальное издание
Комбикорма. Часть 8. Корма животного и
растительного происхождения.
Методы анализа: Сб. ГОСТов. –
М.: ИПК Издательство стандартов, 2002
Источник
 
ГОСТ Р 51426-2016
Группа С19
____________________________________________________________________
Текст Сравнения ГОСТ Р 51426-2016 с ГОСТ Р 51426-99 см. по ссылке.
– Примечание изготовителя базы данных.
____________________________________________________________________
ОКС 65.120
07.100.30
Дата введения 2018-01-01
1 РАЗРАБОТАН Открытым акционерным обществом “Всероссийский научно-исследовательский институт комбикормовой промышленности” (ОАО “ВНИИКП”)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 004 “Комбикорма, белково-витаминно-минеральные концентраты, премиксы”
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 октября 2016 г. N 1521-ст
4 Настоящий стандарт разработан с учетом основных нормативных положений международного стандарта ИСО 6887-1:1999* “Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила подготовки исходной суспензии и десятикратных разведений” (ISO 6887-1:1999 “Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination – Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions”, NEQ).
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. – Примечание изготовителя базы данных.
5 ВЗАМЕН ГОСТ Р 51426-99 (ИСО 6887-83)
Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона “О стандартизации в Российской Федерации”. Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе “Национальные стандарты”, а официальный текст изменений и поправок – в ежемесячном информационном указателе “Национальные стандарты”. В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя “Национальные стандарты”. Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)
Введение
Ввиду большого разнообразия кормов, комбикормов и комбикормового сырья данный горизонтальный метод может быть неприменимым для исследования определенной продукции. Если необходимо и диктуется вескими техническими причинами, то рекомендуется использовать другие методы, специально разработанные для этого вида продукции. Тем не менее, необходимо приложить все усилия, чтобы применять именно данный горизонтальный метод.
Настоящий стандарт разработан с учетом основных нормативных положений международного стандарта ISO 6887-1:1999 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка проб, исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований. Часть 1. Общие правила подготовки исходной суспензии и десятикратных разведений (Microbiology of food and animal feeding stuffs – Preparation of test samples, initial suspension and decimal dilutions for microbiological examination – Part 1: General rules for the preparation of the initial suspension and decimal dilutions) [1]. Настоящий стандарт устанавливает общие правила аэробного приготовления исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований продуктов, предназначенных для потребления животными.
Первая часть ИСО 6887 устанавливает общие правила подготовки исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологического исследования.
Для ряда проб при подготовке исходной суспензии, в зависимости от физического состояния (например, сухая или очень густая проба) или присутствия ингибиторов или кислотности и т.д. необходимо применять специальные меры.
В этих случаях рекомендуется использовать специальные разбавители или методики приготовления исходной суспензии, предназначенные для определенных проб в соответствующем специальном стандарте. К ним относятся:
– доведение pH суспензии пробы до нейтрального значения;
– использование только пептонной воды с буферным раствором (и никаких других разбавителей) для проб с высоким ингибиторным эффектом или продукции, содержащей микроорганизмы, испытывающие стресс (например, кислотный pH);
– специальные методики повторного гидрирования проб с низкой активностью воды для ослабления осмотического шока;
– применение подходящих температур для получения суспензии;
– методики оживления для реабилитации микроорганизмов в стрессовом состоянии, полученном в результате обработки и хранения проб;
– методики гомогенизации и продолжительность процедур, специфические для определенных проб (например, зерновых) и/или некоторых определяемых микроорганизмов (например, дрожжей и плесеней);
– применение поверхностно-активных веществ для проб с высоким содержанием жиров.
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на корма, комбикорма и комбикормовое сырье и устанавливает общие правила аэробного приготовления исходной суспензии и десятикратных разведений для микробиологических исследований.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.2.007.0 Система стандартов безопасности труда. Изделия электротехнические. Общие требования безопасности
ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
ГОСТ 4198 Реактивы. Калий фосфорнокислый однозамещенный. Технические условия
ГОСТ 4233 Реактивы. Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 6709 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ 13805 Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей. Технические условия
ГОСТ Р 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
Примечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю “Национальные стандарты”, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя “Национальные стандарты” за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:
3.1 исходная суспензия, первичное разведение (initial suspension, primary dilution): Суспензия, раствор или эмульсия, полученные путем смешивания определенной массы или объема исследуемой продукции (или анализируемой пробы, отобранной от продукции) с девятикратным объемом разбавителя; при наличии крупных частиц твердой дисперсной фазы суспензию выдерживают до их осаждения.
3.2 ряд десятикратных разведений (further decimal dilutions): Суспензии или растворы, полученные путем смешивания определенного объема исходной суспензии (см. 3.1) с девятикратным объемом разбавителя и повторением этой процедуры с каждым последующим разведением, приготовленным подобным путем, с целью получения нужного разведения, пригодного для инокуляции в питательную среду.
3.3 специальный стандарт (specific standard): Стандарт или руководство, описывающее исследование специальных видов продукции (или группы) для обнаружения или подсчета микроорганизмов определенного вида (или группы микроорганизмов).
4 Сущность метода
Сущность метода заключается в приготовлении исходной суспензии (см. 3.1) с равномерным, насколько это возможно, распределением микроорганизмов, содержащихся в навеске.
При необходимости готовят ряд десятикратных разведений (см. 3.2) с целью сокращения количества микроорганизмов в единице объема, чтобы после инкубации наблюдать растут они или нет (при посеве в жидкие питательные среды) или подсчитать число колоний (в случае плотных питательных сред), как установлено в соответствующем специальном стандарте.
Примечание – Чтобы ограничить диапазон подсчета микроорганизмов в заданном интервале или если предполагается большое количество микроорганизмов, допускается производить посев только с тех десятикратных разведений (не менее двух последовательных разведений), необходимых для подсчета количества микроорганизмов в соответствии с формулой по ГОСТ ISO 7218.
5 Требования безопасности
5.1 При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования безопасности при работе с микроорганизмами по ГОСТ ISO 7218.
5.2 При выполнении испытаний необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроприборами по ГОСТ 12.2.007.0 и ГОСТ Р 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на используемые приборы.
5.3 Помещение должно быть оснащено вентиляционными системами по ГОСТ 12.4.021, средствами пожаротушения по ГОСТ 12.4.009 и соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004.
5.4 Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать допустимых значений по ГОСТ 12.1.005.
6 Требования к проведению испытаний
6.1 Условия проведения испытаний
При подготовке и проведении испытаний должны быть соблюдены следующие условия:
– температура окружающей среды | от 15°C до 25°C; |
– относительная влажность воздуха | не более 80%; |
– атмосферное давление | от 84,0 до 106,7 кПа; |
– напряжение в сети | от 198 до 242 В. |
6.2 Требования к квалификации оператора
К выполнению испытаний и обработке их результатов допускают специалиста, соответствующего требованиям к персоналу по ГОСТ ISO 7218 (раздел 4).
7 Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы
Используют лабораторное оборудование для микробиологических исследований, соответствующее требованиям ГОСТ ISO 7218 (раздел 5):
– смесительное оборудование;
– pH-метр;
– автоклав;
– термостат;
– холодильник;
– стерилизационный сушильный шкаф;
– дозатор (устройство для разливки) питательных сред и реактивов;
– нагревательная плитка;
– дистиллятор.
Весы неавтоматического действия по ГОСТ R OIML 76-1* с пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,01 г.
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ OIML R 76-1. – Примечание изготовителя базы данных.
Колбы по ГОСТ 1770 или флаконы вместимостью, достаточной для того, чтобы поместить 90 см разбавителя, используемого для приготовления исходной суспензии, или количество, кратное 90 см.
Пробирки ГОСТ 1770 вместимостью, достаточной для того, чтобы поместить и оставить сверху пространство, необходимое для перемешивания 10 см (или количества, кратного 10 см) пробы жидкого продукта или исходной суспензии, или дальнейших десятикратных разведений.
Пипетки градуированные, вымеряемые на слив жидкости от любой отметки до сливного кончика 2(5)-1(2)-1(2)-1(10) по ГОСТ 29227.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805.
Натрий хлористый по ГОСТ 4233, х.ч.
Натрий фосфорно-кислый двузамещенный 12-водный по ГОСТ 4172, х.ч.
Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198, х.ч.
8 Отбор проб
Отбор проб в соответствии с ГОСТ ISO 7218 (подраздел 8.1) и с нормативными документами на анализируемые продукты.
9 Подготовка проб
Подготовка проб к испытанию – по ГОСТ ISO 6498.
10 Разбавители
10.1 Основные материалы
Для улучшения воспроизводимости результатов при приготовлении разбавителя рекомендуется использовать обезвоженные основные компоненты или обезвоженный готовый препарат. Следует строго соблюдать инструкции изготовителя.
Химические реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а. и пригодными для микробиологических исследований.
Используемая вода должна быть дистиллированной или деионизованной.
10.2 Разбавители общего назначения
10.2.1 Пептонно-солевой раствор
10.2.1.1 Состав:
– пептон | – 1,0 г; |
– натрий хлористый | – 8,5 г; |
– вода | – 1000 см. |
10.2.1.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде, подогревая при необходимости.
Доводят значение pH таким образом, чтобы после стерилизации оно было равно 7,0±0,2 при температуре 25°C.
10.2.2 Забуференная пептонная вода
10.2.2.1 Состав
– пептон | – 10,0 г; |
– натрий хлористый | – 5,0 г; |
– натрий фосфорно-кислый двузамещенный 12-водный (NaHPO·12НO) | – 9,0 г; |
– калий фосфорнокислый однозамещенный (KHPO) | – 1,5 г; |
– вода | – 1000 см. |
10.2.2.2 Приготовление
Компоненты растворяют в воде, при необходимости подогревая.
Доводят значение pH таким образом, чтобы после стерилизации оно было равно 7,0±0,2 при температуре 25°C.
10.3 Разбавители для специальных целей
Разбавители для специальных целей указаны в специальном стандарте, подходящем к анализируемому продукту.
10.4 Распределение и стерилизация разбавителя
Разбавитель (см. 10.2 или 10.3) разливают в объемах, необходимых для приготовления исходных суспензий по флаконам подходящей вместимости.
Разбавитель (см. 10.2 или 10.3) разливают в объемах, необходимых для приготовления десятикратных разведений по пробиркам или флаконам в таких количествах, чтобы после стерилизации каждая пробирка или флакон содержал 9,0 см. Изменение конечного объема после стерилизации не должно превышать ±2%.
Примечание – Если предполагается исследовать несколько групп микроорганизмов, используя различные среды для их выращивания, может возникнуть необходимость распределения всех разбавителей (или некоторых из них) в количестве, превышающем 9,0 см; размер колб и пробирок устанавливается в соответствии с объемом разбавителя.
Пробирки или флаконы закрывают и стерилизуют в автоклаве при температуре 121°C в течение 15 мин.
Если разбавитель не используют сразу, его хранят в темноте при температуре от 0°C до 5°C не более 1 мес в условиях, не допускающих никаких изменений в его объеме и составе.
11 Проведение разведений
11.1 Навеска и исходная суспензия (первичное разведение)
В стерильную чашку или стерильный пластиковый пакет берут навеску массой m, г, с погрешностью взвешивания ±5%, или отмеряют объем V, см, с погрешностью измерения ±5% (если не указано иначе, минимальное значение массы составляет 10 г, объема – 10 см), представительные для данной пробы для испытания (см. раздел 9).
Добавляют девятикратное количество (по массе или объему) разбавителя. Это количество рекомендуется измерять с погрешностью измерения ±5%.
Примечания
1 В некоторых случаях, особенно для проб, имеющих слишком вязкую или слишком густую исходную консистенцию, может возникнуть необходимость увеличить объем разбавителя. Этот объем необходимо учитывать в расчете для последующих операций и/или при выражении результатов.
2 Первичное разведение отчасти обуславливает значение нижнего предела подсчета, который также зависит и от применяемой техники (например, способа разлива по чашкам 1 см посевного материала исходной суспензии, для которого пределом подсчета является 10 микроорганизмов на грамм). Если для подсчета в определенных пробах необходимо опуститься ниже этого предела, то можно использовать меньший объем разбавителя. Следует отметить, что инокуляция такой исходной суспензии может вызвать затруднения в результате дисбаланса в соотношении количества исходной суспензии и среды (ингибирования микробного роста вследствие увеличения концентрации компонентов питательной среды).
________________
В этом случае используемый объем разбавителя должен быть указан в протоколе испытания.
Чтобы избежать повреждения микроорганизмов при неожиданных изменениях температуры, температура разбавителя во время описанной ниже работы, должна быть примерно равна температуре окружающего воздуха, за исключением испытания определенных проб (см. специальный стандарт).
Смесь гомогенизируют в соответствии с рекомендациями ГОСТ ISO 7218 (подразделы 5.4, 5.19).
Если необходимо, дают отстояться крупным частицам в течение 15 мин. Можно использовать системы фильтрования, дающие сопоставимые результаты.
В случае подсчета спор, после приготовления исходной суспензии необходимо немедленно провести ее тепловую обработку, например, в течение 10 мин при температуре 80°C, с последующим быстрым охлаждением.
11.2 Ряд десятикратных разведений
Пипеткой переносят 1 см исходной суспензии с погрешностью измерения ±5% в пробирку, содержащую 9 см стерильного разбавителя соответствующей температуры.
________________
Погрешность измерения ±5% учитывает имеющиеся ограничения используемых в настоящее время пипеток.
Примечание – Если необходим больший объем десятикратного разведения, можно добавить определенный объем (свыше 1 см) исходной суспензии с погрешностью измерения ±5% в пробирку, содержащую девятикратный объем стерильного разбавителя при необходимой температуре.
Для достижения оптимальной точности пипетку погружают в исходную суспензию на глубину не более 1 см.
Стараются избегать любого контакта между пипеткой с посевным материалом и стерильным разбавителем.
Пол
